Методы определения количества микроорганизмов
При определении общего количества микроорганизмов в воздухе удобно воспользоваться методом оседания по Коху (седиментационный метод). Чашки Петри, с мясопептонным агаром или суслом-агаром (последний для учета грибов) оставляют открытыми на 5—10 мин, а если воздух чистый,— в течение получаса. Ставят их на разном расстоянии от пола и в разных местах. Вместе с пылью и капельками влаги на поверхность агара оседают и микробы. По истечении установленного времени чашки закрывают крышками, ставят их вверх дном и выдерживают при температуре 22 °С в течение 5 дней или при 40°С в течение 48 ч (для выращивания грибов — в течение 5—7 дней). Допуская, что каждая колония выросла из одной микробной клетки, подсчитывают число бактерий в воздухе. На поверхность чашки площадью 100 см2 в течение 5 мин оседает примерно столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха.
Пользуясь этим методом, можно получить только приблизительное представление о содержании микробов, в воздухе, так как он не учитывает скорости движения воздуха и других факторов. Если в среднем на одной чашке Петри выросло до 200 колоний, то воздух считается чистым, свыше 200 — загрязненным. Пересчет количества микроорганизмов в исследуемом воздухе, полученного чашечным методом, не рекомендуется производить на количество микроорганизмов, содержащихся в единице объема воздуха, так как данные пересчета могут расходиться с действительным количеством микробов воздуха.
Подобным же образом можно исследовать микрофлору рук. Для этого левую или правую руку (ладони, пальцы, межпальцевые и подногтевые пространства) протирают стерильными ватными тампонами. Полученный смыв высевается на МПА в разведении 1/100 или 1/10000.
Бактериоскопический метод подсчета (метод отпечатков) применяется для оценки свежести мяса, однако может быть использован и для ориентировочной оценки количественного и качественного состава микрофлоры других продуктов — рыбы, полуфабрикатов. Для оценки свежести мяса из пробы готовят три мазка-отпечатка: один — из поверхностного слоя с глубины 1—2 мм, другой — с глубины 2—2,5 см и третий — с глубины 3—3,5 см.
При изготовлении препарата-отпечатка из поверхностного слоя мяса стерильными ножницами вырезают кусочек 0,5—1 г и срезанной стороной прижимают для получения отпечатка и поверхности профламбированного и охлажденного предметного стекла. Чтобы приготовить препарат-отпечаток из глубоких слоев, поверхность мяса сначала прижигают нагретым шпателем, затем стерильным скальпелем производят глубокий разрез, пинцетом раздвигают края, вырезают кусочек мяса и, прижимая к .поверхности предметного стекла, делают отпечаток.
Мазки сушат на воздухе, фиксируют в пламени спиртовки, окрашивают по Граму и микроскопируют (можно окрашивать и обычным методом).
Окраска по Граму используется для оценки возможного присутствия, бактерий коли-тифозной группы, все представители которой грамотрицательны.
Просматривают не менее пяти полей зрения. В каждом подсчитывают отдельно кокковые и палочкообразные клетки, а затем вычисляют их среднеарифметическое количество в одном поле зрения.
В соответствии с действующим на мясо ГОСТом результаты испытаний оцениваются следующим образом: мясо свежее, мясо сомнительной свежести и мясо несвежее.
Мясо свежее. В поле зрения в мазках-отпечатках, приготовленных из поверхностного слоя, обнаруживается небольшое количество микробов (единичные кокки и палочки), окрашенных грамположительно. В мазках из глубоких слоев микробы совсем не обнаруживаются или встречаются единичные клетки. На стекле нет следов распавшейся ткани мяса.
Мясо сомнительной свежести. В поле зрения в мазках, приготовленных из поверхностного слоя, обнаруживается несколько десятков микробов: в мазках из глубинных слоев — не более 20— 30 бактерий с преобладанием кокковых форм. Заметны следы распада мышечной ткани.
Мясо несвежее. В мазках-отпечатках, приготовленных как из поверхностных, так и из глубинных слоев, почти вся площадь поля зрения покрыта клетками микробов, среди которых преобладают грамотрииательные палочки. В таком мясе кокки почти отсутствуют. В поле зрения в большом количестве обнаруживаются палочки и распавшаяся мышечная ткань.
Pages: 1 2