Оценка санитарного состояния различных объектов методом титра
При исследовании мясных и молочных продуктов посев их производится на питательную среду Кесслера (пептонная вода с бычьей желчью, лактозой и генцианвиолетом).
Среда Несслера. Готовят ее следующим образом: к 1 л водопроводной воды прибавляют 10 г пептона и 50 мл желчи (бычьей или других сельскохозяйственных животных). При помешивании прогревают смесь в течение 20—30 мин на водяной кипящей бане, после чего фильтруют через вату. В фильтрате растворяют 2,5 г глюкозы, доводят объем до 1 л, устанавливают с помощью раствора соляной кислоты или едкого натра рН 7,4—7,6 и после этого добавляют 2 мл водного 1 %-ного раствора кристаллвиолета (кристаллического фиолетового).
Полученную среду разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют при 1 эти в течение 10 мин.
Готовая среда должна иметь темно-фиолетовую окраску.
При анализе жидкого продукта или смывов с рук, оборудования и с других объектов стерильной пипеткой вносят 1 мл исследуемой жидкости в первую пробирку с питательной средой и той же пипеткой — 1 мл жидкости в пробирку с 9 мл стерильной воды (первое разведение).
Новой пипеткой из пробирки первого разведения переносят 1 мл во вторую пробирку с питательной средой и 1 мл во вторую пробирку с 9 мл стерильной воды (второе разведение).
Из второго разведения 1 мл жидкости переносят в третью пробирку с питательной средой и той же пипеткой — 1 мл в третью пробирку с 9 мл стерильной воды (третье разведение).
Из третьего разведения новой пипеткой 1 мл жидкости вносят в четвертую пробирку с питательной средой. В результате в пробирки с элективной питательной средой будет внесено -исследуемой жидкости (в мл): 1; 0,1; 0,01; 0,001.
Засеянные пробирки помещают в термостат при температуре 42—43 °С на 24 ч.
Необходимо описать постановку опыта и зарисовать схему посева исследуемого объекта. Анализ результатов выполняется на следующем занятии. Для этого необходимо просмотреть пробирки со средой Кесслера и выявить рост и газообразование (о развитии бактерий судят по помутнению и изменению окраски среды; о способности к газообразованию судят по накоплению газа в поплавке), затем отметить тот наименьший объем (или массу) исследуемого материала, который вызвал указанные изменения среды. Это будет титр кишечной палочки. Если газообразование не будет наблюдаться, то титр устанавливают условно по помутнению среды.
После установления титра следует провести высев из пробирок с забродившей средой в чашку Петри на плотную питательную среду Эндо, чтобы проверить, кишечная ли палочка вызвала брожение, так как подобные изменения в среде могут вызвать и некоторые другие бактерии.