Изучение морфологии бактерий
Если исследуемые микроорганизмы находятся в жидкой среде, то на предметное стекло наносят каплю микробной суспензии (взвеси) без добавления воды или другой жидкости. Суспензию берут стеклянной палочкой или бактериологической петлей.
Окраску мазка осуществляют следующим образом. На охлажденный фиксированный мазок наносят 2—3 капли красителя. Через 40—60 с смывают его слабой струей воды из промывалки, пока вода не станет прозрачной. Промытый мазок высушивают либо на воздухе, либо промокают его фильтровальной бумагой.
На сухой препарат наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с объективом 90х. При сложных способах окраски применяют два красящих вещества и более.
Окраска бактерий по методу Грама имеет большое значение для распознавания бактерий и отнесения к одной из групп: грамположительным (окрашивающиеся по Граму) или грамотрицательным (не окрашивающиеся по Граму).
Сущность метода заключается в том, что образующиеся при окрашивании клеток сложные соединения красителя с йодом и белками цитоплазмы у грамположительных бактерий удерживаются при последующей обработке препарата спиртом и клетки сохраняются окрашенными, а у грамотрицательных — обесцвечиваются. Здесь, по-видимому, играет роль и неодинаковая проницаемость клеточной оболочки и цитоплазматической мембраны для комплекса «краситель — йод» в связи с различием химического состава и структуры этих оболочек у разных бактерий. Возможно, что различное отношение к окраске по Граму связано с наличием в цитоплазме грамположительных бактерий значительного количества магниевой соли рибонуклеиновой кислоты, которая образует с генцианвиолетом и йодом нерастворимый в спирте комплекс.
Техника окраски по Граму. Заключается она в следующем. На фиксированный мазок наносят 2—3 капли раствора генциан-виолета и через 2—3 мин окрашивания краску смывают водой. На препарат наносят 2—3 капли раствора Люголя и спустя 2— 3 мин смывают водой. Препарат на 30—40 с погружают в стаканчик с 96 %-ным раствором спирта и быстро промывают водой. Затем препарат в течение 1—2 мин докрашивают разведенным фуксином, промывают водой и просушивают фильтровальной бумагой. Грамположительные бактерии будут фиолетовыми, грамотрицательные — красными, так как обесцвеченные спиртом, они воспринимают дополнительную окраску фуксином.
При окрашивании мазка по Граму следует обратить внимание на процесс обесцвечивания мазка спиртом. При недостаточной обработке все клетки сохраняют окраску, при избыточной — обесцвечиваются. Для контроля окраски на одном предметном стекле следует сделать три мазка бактерий: один — заведомо грамположительных бактерий, другой — заведомо грамотрицательных, третий — исследуемых микроорганизмов. Микроскопируют препарат с объективом 90х.
В процессе занятий учащимся необходимо промикроскопировать несколько заранее приготовленных окрашенных препаратов, например стафилококков, сарцин, палочковидных бесспоровых и споровых бактерий и др.; обратить внимание на форму клеток, характер их взаимного расположения, наличие и местоположение спор; выполнить зарисовки; освоить технику микроскопирования.
Pages: 1 2