Методы определения количества микроорганизмов
При микробиологическом изучении количественного состава микрофлоры предполагают, что то малое количество материала, которое обычно используется в анализах, должно обеспечивать достаточно точную микробиологическую характеристику всего объекта. С этой целью отбирается средняя проба.
Отбор проб для анализа, предполагающего микробиологические исследования, ведется в целом по принципу обычного отбора средней пробы. Однако выполняется он стерильно, с соблюдением правил асептики. Весь инвентарь предварительно стерилизуют. Чтобы избежать размножения микрофлоры, анализ проводят сразу после ее отбора. Необходимо учитывать возможность очень неравномерного распределения микрофлоры в пищевых продуктах и других объектах. Так, в отстоявшемся свежем молоке основная масса микроорганизмов сосредоточивается в верхнем слое. В вареных колбасах, взятых из магазина, следует ожидать большего числа микроорганизмов на оболочке и во внешнем слое и меньшего — в центральной части батона.
При анализе воды, отбираемой из крана, надо учитывать возможность накопления микрофлоры в трубах вблизи крана. Чтобы получить правильные результаты, следует некоторую часть воды слить, а анализу подвергнуть следующие порции.
Для плодов и овощей, у которых микрофлора сосредоточена на поверхности, удобно пользоваться смывами. Плоды помещают в заранее простерилизо-ванный сосуд и в него же вливают определенное количество стерильной воды. После энергичного встряхивания в течение нескольких минут микроорганизмы оказываются смытыми в воду и она может использоваться для посевов.
При исследовании спецодежды и полотенец, прилавков, котлов и т. д. целесообразно воспользоваться трафаретом из проволоки с внутренней площадкой в 25 или 50 см2. Трафарет стерилизуют в пламени горелки, прикладывают к исследуемой поверхности ограниченную им площадку трехкратно обмывают стерильными ватными тампонами, смоченными в колбе со 100 мл стерильной воды. Обрабатывают четыре площадки в разных местах объекта, с тем чтобы усреднить конечные результаты исследования. Все 12 тампонов собирают в пустую стерильную колбу и в нее выливают остатки воды, в которой их смывали. После встряхивания и десорбции микрофлоры с тампонов в воду ее подвергают исследованию.
Результаты анализа обычно относят к 1 г вещества, 1 мл жидкости, 100 см2 поверхности. Особенности анализа других объектов будут отмечены далее.
При выполнении работы необходимо строго учитывать количество материала, взятого для исследования, готовить разведения в точно отмеренном количестве воды и учитывать степень разведения при окончательном подсчете. Для практического освоения методов микробиологического анализа каждая работающая группа из 2—4 человек должна самостоятельно выполнить посевы из заранее приготовленных образцов (1 г или 1 мл пищевого продукта в колбе со 100 мл воды). Могут быть исследованы воздух, поверхности рабочих столов, прилавка.
Из колбы после тщательного, но осторожного взбалтывания (чтобы не замочить ватную пробку) стерильной бактериологической пипеткой отбирают 1 мл жидкости и вносят в первую чашку Петри. Той же пипеткой еще 1 мл переносят во вторую колбу со 100 мл стерильной воды. После взбалтывания этой колбы для равномерного распределения внесенного материала в воде из нее новой пипеткой отбирают 1 мл жидкости и вносят во вторую чашку Петри и затем второй же пипеткой — 1 мл в третью колбу. Из нее после взбалтывания новой пипеткой отбирают 1 мл и вносят в третью чашку Петри.
Таким приемом получают разведения материала в 100, 10000 и 1 000000 раз. В случае если предполагается меньшее обсеменение материала, то вместо колб можно использовать пробирки с 10 мл стерильной воды. Это позволит получить разведения, отличающиеся концентрацией материала и находившихся в нем микроорганизмов не в 100, а лишь в 10 раз. После разливки материала сразу же необходимо в каждую чашку Петри внести теплый (около 45— 50 °С) расплавленный МПА из заранее подготовленных пробирок. Более горячий агар использовать не следует, так как он вызовет гибель части микроорганизмов, что исказит конечные результаты анализа. Агар с меньшей температурой также непригоден, так как быстро застывает.
Внесенная проба смешивается с питательной средой (МПА) осторожным покачиванием и легким вращением закрытой чашки. Все чашки для застывания среды оставляют на горизонтальной поверхности на 2—3 мин. После нанесения этикеток чашки, перевернутые вверх дном, помещают в термостат для выращивания, которое ведут при температуре 37 °С в течение 24 ч или при 22 °С в течение 48 ч.
Pages: 1 2