Дифференциация бактерий группы кишечных палочек по ТИМАЦ
Дифференциация бактерий группы кишечных палочек по ТИМАЦ. В связи с неодинаковым санитарно-показательным значением отдельных родов бактерий группы кишечных палочек их дифференцируют на основании следующих признаков, образующих комплекс ТИМАЦ (ТЛИМАЦ).
Т — температурный тест (тест Эйкмана);
И —тест индолообразования;
М —реакция с метиловым красным;
А — реакция на ацетилметилкарбинол (реакция Фогес-Проскауэра);
Ц — цитратный тест;
Л — сбраживание лактозы.
Температурный тест (тест Эйкмана). Способность сбраживать углеводы (лактозу, глюкозу, маннит) при температуре культивирования, превышающей температуру тела человека, получила название температурного теста. Для дифференциации Escherichia от Citrobacter и Enterobacter предложена температура культивирования 43—44°С. Для Escherichia температурный тест положительный, т. е. они способны сбраживать углеводы при 43—44°С, большинство же бактерий родов Citrobacter и Enterobacter такой способностью не обладает. Температурный тест определяют на специальных средах Эйкмана, Кесслер, Булижа.
Тест индолообразования. Способность продуцировать индол присуща Escherichia; бактерии из родов Citrobacter и Enterobacter индола не образуют. Штаммы Е. coli, выделенные из кишечника человека, образовывали индол в 90,1—98,6% случаев.
Реакция с метиловым красным. Реакция заключается в определении интенсивности образования кислоты при ферментации тяикробом углевода. Реакцию проводят следующим образом. К культуре (3—5-суточ-ного возраста), выращенной на среде Кларка, добавляют несколько капель индикатора метилового красного. При рН 5,0 и ниже индикатор изменяет светло-желтый цвет на красный, что свидетельствует о сильном кисло-тообразовании. Е. coli и Citr. coli citrovorum дают красное окрашивание среды, Ent. aerogenes — желтое. При рН выше 5 среда остается светло-желтой.
Реакция на ацетилметилкарбинол. Ароматическое вещество — ацетилметилкарбинол (ацетоин) образуют Ent. aerogenes; Е. coli и Citr. coli citrovorum такой способностью не обладают.
Для постановки реакции к 5 мл культуры 4—5-суточного возраста, выращенной на пептонной воде с глюкозой или на среде Кларка, добавляют такой же объем 40%-ного раствора КОН. При наличии ацетилметилкарбинола среда окрашивается в розовый цвет.
Цитратный тест. Способность микроорганизма усваивать в качестве единственного источника углерода лимонную кислоту или ее соли называют цитратным тестом. Изучаемую культуру высевают на цитратную синтетическую среду (жидкую Козера или плотную Симмонса). Citrobacter и Enterobacter растут на цитратных средах и получили название цитратположительные или цитратцссимилирующие бактерии, тогда как Escherichia не дают роста на указанных средах и называются цитратотрицательными.
Сбраживание лактозы. Способность сбраживать лактозу присуща большинству семейства Enterobaeteriaceae. Представители рода Escherichia (за исключением лактозоотрицательных вариантов Е. coli) сбраживают лактозу, Citrobacter и Enterobacter сбраживают лактозу непостоянно.
Признаки, входящие в этот комплекс, определяют принадлежность бактерий группы кишечных палочек к одному из трех родов: Escherichia, Citrobacter и Enterobacter.
Однако в кишечнике человека и животных и особенно во внешней среде можно обнаруживать различные варианты кишечной палочки, которые имеют нетипичные для рода Escherichia признаки комплекса ТИМАЦ (ТЛИМАЦ). Это объясняется тем, что, попадая во внешнюю среду, Е. coli подвергается действию различных факторов внешней среды, в результате чего происходит изменение ряда ее биологических свойств. Например, после пребывания во внешней среде Е. coli утрачивает способность сбраживать лактозу, ферментировать углеводы при 43 и даже при 37°С, но приобретает свойство ассимилировать цитраты.
При длительном применении антибиотиков в кишечнике человека также обнаруживают различные варианты кишечной палочки. Особый интерес представляют лактозоотрицательные варианты кишечной палочки. Это измененные эшерихии, утратившие способность сбраживать лактозу. Они выделяются при кишечных инфекциях человека (брюшном тифе, дизентерии и др.) в период выздоровления. Обнаружение лактозоотрицательных вариантов Е. coli в объектах внешней среды свидетельствует об опасном фекальном загрязнении, т. е. эпидемиологической опасности этих объектов для человека.
В комплексе ТИМАЦ температурный и цитратный тесты являются основбыми, наиболее стабильными, позволяющими дифференцировать бактерии группы кишечных палочек фекального происхождения от бактерий группы кишечных палочек, обитающих во внешней среде.
Колиметрия. Колиметрией называют количественный учет бактерий группы кишечных палочек в объектах внешней среды и пищевых продуктах. Для определения степени загрязненности объекта или продукта бактериями группы кишечных палочек применяют два микробиологических показателя: коли-титр и коли-индекс (см. Общая микробная обсемененность объекта).
В настоящее время разработаны нормы содержания кишечных палочек в отдельных объектах внешней среды, продуктах. Эти нормы введены в государственные общесоюзные стандарты, в республиканские, ведомственные технические условия, инструкции. Так, для питьевой воды допустимый титр кишечной палочки определен ГОСТ 2874—73 не менее 300, для пастеризованного молока коли-титр должен быть не менее 0,3 (РТУ 46—61).