Исследование воды (часть 2)
При анализе воды открытых водоемов для посева 0,1 мл и меньших объемов воды делают несколько десятикратных разведений исследуемой пробы в стерильной воде. Разведения готовят следующим образом: стерильной пипеткой отбирают 1 мл исследуемой воды и вносят в пробирку с 9’мл стерильной воды. При этом пипетку нельзя погружать в стерильную воду во избежание смывания микробов с ее поверхности. Другой стерильной пипеткой перемешивают внесенную и стерильную воду. Для этого из нижней части пробирки набирают воду, поднимают пипетку и выпускают воду в верхнюю часть. Повторяют эту операцию 3—4 раза. Затем этой же пипеткой набирают 1 мл приготовленного разведения и переносят в следующую пробирку, также не погружая ее в воду, и так далее до получения требуемого разведения. Для приготовления каждого разведения берут стерильную пипетку.
Из каждого или из двух последних разведений для посева отбирают по 1 мл и вносят в стерильные чашки Петри. Дальнейший ход анализа такой же, как и при исследовании водопроводной воды.
Выросшие колонии подсчитывают с помощью лупы с увеличением в 2—5 раз или прибора для счета колоний бактерий МРТУ 422401—64. Для этого чашку кладут вверх дном на черную бумагу и для большей точности каждую сосчитанную колонию отмечают со стороны дна тушью или чернилами для стекла. Подсчитывают все колонии, выросшие как на поверхности, так и в глубине МПА. Оценивают только те разведения, при посеве которых на чашках выросло от 30 до 300 колоний. Если колоний выросло более 300 и нет другого большего разведения, то подсчет колоний производят с помощью счетной пластинки. Для этого на чашку, перевернутую вверх дном, кладут счетную пластинку и подсчитывают колонии в 20 квадратиках, расположенных в различных местах чашки. Затем выводят среднее арифметическое в 1 см2 и пересчитывают на всю площадь чашки.
Результат подсчета колоний в каждой чашке выражают в количестве бактерий в 1 мл исследуемой воды с учетом посеянного объема или разведений. За окончательное количество бактерий в 1 мл исследуемой воды принимают среднее арифметическое число, полученное при подсчете на двух параллельных чашках одного или разных разведений.
Результаты подсчета колоний округляют следующим образом. Если количество колоний составляет от 1 до 100, то записывают те числа, которые получены; если от 101 до 1000, то результат округляют до 10; если от 1001 до 10 000, то результат округляют до 100 и т. д.
Определение бактерий группы кишечных палочек. Количество бактерий группы кишечных палочек определяют методом мембранных фильтров и методом бродильных проб.
Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема исследуемой воды на мембранный фильтр, культивировании их при 37°С на среде Эндо с последующим изучением выросших колоний и подсчетом количества бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды.
Мембранные фильтры или ультрафильтры представляют собой нитроцеллюлозные пленки. Выпускают 6 номеров ультрафильтров с различной степенью порозности. Для учета бактерий группы кишечных палочек в воде применяют фильтры № 3, имеющие средний размер пор 0,7 мкм.