Исследование воды (часть 3)
Вынутые из упаковки фильтры проверяют на отсутствие дефектов и затем опускают по одному в химический стакан с нагретой до 60—80°С дистиллированной водой. Воду доводят до кипения, после чего ее заменяют и кипятят еще 10 мин. Смену воды и последующее кипячение повторяют 3—5 раз до полного удаления остатков растворителей из фильтров, после чего их можно использовать.
Воду фильтруют с помощью прибора Зейтца или Семенова — Гольдмана. Перед фильтрованием прибор Зейтца протирают ватным тампоном, смоченным спиртом, и стерилизуют фламбированием. После охлаждения на нижнюю часть прибора (столик) помещают фламбированным пинцетом стерильный мембранный фильтр, прижимают его верхней частью прибора (воронкой) к столику и закрепляют. Затем в воронку прибора при соблюдении правил асептики наливают исследуемую воду и создают вакуум в приемном сосуде. Через один мембранный фильтр пропускают такое количество воды, чтобы на фильтре выросло не более 30 колоний.
Воду, подаваемую в водопроводную сеть (Москва и Ленинград) и воду артезианских скважин фильтруют в объеме 500 мл, воду других городов — в объеме 300 мл (через 1 мембранный фильтр пропускают не более 100 мл воды).
Чистую воду открытого водоема фильтруют в объеме 100, 10, 1 и 0,1 мл. При исследовании загрязненной воды ее предварительно, разводят стерильной водой. Фильтруют сначала меньшие, а затем большие объемы воды. После окончания фильтрования воронку снимают, фильтр осторожно приподнимают за край фламбированным пинцетом и переносят его, не переворачивая, на среду Эндо. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх. Под каждым фильтром со стороны дна чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной воды, даты посева и номера пробы. На одну чашку можно поместить 3—4 фильтра с условием, чтобы фильтры не соприкасались.
Если исследуемая вода содержит большое количество взвешенных веществ, то ее фильтруют сначала через предварительный фильтр № 6. Для этого его помещают в прибор над фильтром № 3. После окончания фильтрования оба фильтра переносят на среду Эндо. При выведении результатов анализа учитывают рост бактерий на обоих фильтрах.
Чашки с фильтрами на среде Эндо помещают в термостат дном вверх и культивируют при 37°С в течение 18—24 ч, после чего оценивают результаты исследования. Наличие колоний с неровной поверхностью и краями, а также других колоний, нетипичных для бактерий группы кишечных палочек, позволяет дать отрицательный ответ на присутствие этих бактерий в воде.
При наличии на фильтрах колоний, типичных для бактерий группы кишечных палочек (темно-красных с металлическим блеском и без него, розовых, прозрачных), из нескольких колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскрпируют. При обнаружении в мазках грамотрицательных коротких полиморфных, не образующих спор палочек, выполняют оксидазный тест.