Исследование воды (часть 4)
Оксидазный тест предназначен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитных бактерий, которые обладают активной оксидазой и окисляют фенилендиаминовые соединения до индофенола, окрашивающего колонии в ярко-синий цвет.
Для определения оксидазной активности бактерий готовят специальный реактив: 30—40 мг α-нафтола растворяют в 2,5 мл ректификованного этилового спирта, добавляют 7,5 мл дистиллированной воды и 40—60 мг диметил-n-фенилендиамина. Реактив готовят непосредственно перед определением.
Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, обильно смоченный реактивом. Через 2—4 мин оценивают результат.
Колонии посиневшие или с синим ободком относят к семейству Pseudomonadaceae и при анализе не учитывают.
Колонии, не изменившие своего первоначального цвета, — оксида-зоотрицательные, относят к семейству Enterobacteriaceae. Отсутствие оксидазы у темно-красных с металлическим блеском и без него колоний грамотрицательных палочек позволяет дать положительный ответ о наличии бактерий группы кишечных палочек и закончить исследование воды подсчетом оксидазоотрицательных колоний и вычислением коли-индекса.
При обнаружении на фильтрах розовых и бесцветных колоний грамотрицательных палочек с отрицательной оксидазной активностью их подсчитывают и 2—3 изолированных колонии каждого типа высевают в полужидкую среду с глюкозой. Культивируют при 37°С и проводят учет через 4—5 ч. Наличие кислоты и газа в полужидкой среде с глюкозой подтверждает принадлежность этих бактерий к группе кишечных палочек.
Коли-индекс вычисляют следующим образом. Количество бактерий группы кишечных палочек, выросших при посеве исследуемого объема воды, умножают на 1000 мл и делят на весь объем исследуемой воды.
Если на одном из фильтров наблюдается сплошной рост бактерий и подсчет их невозможен, то коли-индекс вычисляют по тому объему, в котором на фильтре выросли изолированные колонии. Например, в 100 мл посеянного объема из фильтре сплошной рост бактерий, в объеме 10 мл на фильтре выросло 12 колоний бактерий кишечной палочки, следовательно, коли-индекс равен (12·1000) : 10= 1200.
Метод бродильных проб. Сущность метода заключается в следующем. Производят посев определенных объемов исследуемой воды в глюкозо- или лактозопептонные среды и культивируют при 37°С в течение 24 ч. Затем высевают на среду Эндо, изучают выросшие колонии и по табл. 16, 17, 18 определяют наиболее вероятное число бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды.
Воду методом бродильных проб исследуют в три этапа. На первом этапе определенные объемы исследуемой воды высевают во флаконы и пробирки с глюкозопептонной средой и индикатором. Флаконы (пробирки) снабжены поплавками для учета газообоазования. Посев 100 и 10 мл воды производят во флаконы и пробирки с 10 и 1 мл концентрированной среды; посев 1 и 0,1 мл воды — в пробирки с 10 мл среды нормальной концентрации. Посевы культивируют при 37°С в течение 24 ч.
На втором этапе исследования из флаконов и пробирок, где отмечено помутнение, образование кислоты и газа, производят высев бактериологической петлей штрихами на поверхность среды Эндо (предварительно чашку со средой Эндо со стороны дна делят на секторы). Посевы культивируют при 37°С 18—24 ч.