Исследование воды (часть 5)
На третьем этапе изучают колонии, выросшие на среде Эндо, отбирают типичные для бактерий группы кишечных палочек, готовят мазки, красят по Граму и микроскопируют. При наличии грамотрицательных полиморфных бесспоровых палочек ставят оксидазный тест.
Для этого 2—3 изолированные колонии каждого типа, выросшие на среде Эндо, снимают петлей и наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом. Если оксидазный тест отрицательный, то в месте нанесения бактериальной массы цвет бумаги не изменяется, если положительный (бактерии имеют активную оксида-зу), то бумага синеет в течение 1 мин.
Наличие на среде Эндо темно-красных колоний грамотрицательных палочек, не обладающих оксидазной активностью, позволяет дать положительный ответ на присутствие бактерий группы кишечных палочек в исследуемом объеме воды.
При анализе питьевой воды учитывают и те секторы на среде Эндо, где выросли только розовые и бесцветные колонии. При обнаружении грамотрицательных палочек, не обладающих оксидазной активностью, из этих колоний (розовых и бесцветных) делают высев в полужидкую среду с глюкозой, культивируют 4—5 ч при 37°С. Наличие кислоты и газа в среде с глюкозой дает право на положительный ответ.
Результат анализа выражают в виде коли-индекса, величину которого определяют по табл. 16—18.
Дополнительные исследования на наличие бактерий—показателей свежего фекального загрязнения. При бактериальном загрязнении воды свыше допустимых норм производят повторный отбор проб с дополнительным их исследованием на наличие бактерий — показателей свежего фекального загрязнения. Свежее фекальное загрязнение в воде устанавливают, определяя наличие кишечных палочек (преимущественно Escherichia coli), обладающих способностью ферментировать лактозу до кислоты и газа при 43±5°С в присутствии ингибиторов посторонней микрофлоры.
Ход анализа следующий. Если при повторном исследовании на секторах среды Эндо выросли темно-красные колонии с металлическим блеском и без него, то по 2—3 таких колонии с каждого сектора засевают в лактозную среду с борной кислотой или в желчно-лактозную среду с бриллиантовым зеленым. Предварительно среды нагревают на водяной бане до 43±0,5°С. Затем засеянные пробирки вместе с баней помещают в термостат и культивируют 24 ч при 43±0,5°С. Наличие мути и газа указывает на присутствие в воде бактерий — показателей свежего фекального загрязнения.