Исследование почвы (часть 1)
Отбор проб почвы. На обследуемой территории до 1000 м2 выделяют два участка по 25 м2 каждый. Один участок выбирают вблизи от источника загрязнения, другой — на той же территории, но вдали от него. С каждого выделенного участка отбирают среднюю пробу, составленную из 5 образцов, взятых по диагонали участка или в четырех точках по краям и одной в центре. При проведении микробиологических исследований поверхностных слоев почвы образцы берут на глубине до 20 см; для установления эффективности обезвреживания нечистот, отбросов образцы почвы берут на глубине 25—150 см, а при исследовании почвы скотомогильников — ниже глубины захоронения не менее чем на 25 см.
Пробы отбирают стерильной железной лопаткой, совком или специальным буром в стерильные широкогорлые банки, которые закрывают ватными пробками. К банке приклеивают этикетку с датой и номером отобранной пробы почвы.
Масса каждого образца должна быть 200—300 г, а смешанного — не менее 1 кг. Отобранные пробы почвы направляют в лабораторию и исследуют сразу же или не позднее чем через 12—18 ч при условии их хранения при 1—5°С.
При подготовке пробы почвы для анализа образцы почвы освобождают от крупных включений (щебень, корни, стекла), размельчают, просеивают через сито, высыпают на стерильную бумагу, тщательно перемешивают и отвешивают 30 г. В колбу вместимостью 500 мл наливают 270 мл стерильной водопроводной воды и вносят отвешенный образец почвы. Колбу встряхивают в течение 10 мин и из полученной суспензии (1 : 10) без отстаивания с учетом предполагаемого загрязнения почвы готовят последующие разведения: для чистых почв до 4 разведения (1 : 10000), для загрязненных — до 6 разведений, (1:1000000).
Приготовленные разведения используют для проведения краткого или полного микробиологического анализа почвы.
Краткий микробиологический анализ почвы. Он включает определение микробного числа и бактерий группы кишечных палочек (коли-титр).
Методика определения микробного числа почвы аналогична той, которую применяют при исследовании воды.
Определение коли-титра почвы проводят методом бродильных проб с использованием среды Кесслер или среды с ТТХ (трифенил-тетразолхлорид), а также методом мембранных фильтров.
Метод бродильных проб с использованием среды Кесслер. Исследования проводят в три этапа. На первом этапе готовят разведения: для чистых почв 1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000; для загрязненных — от 1 : 1000 до 1 : 1000000. После тщательного перемешивания 1 мл почвенной суспензии из разведения 1 : 10 переносят в пробирку с 9 мл среды Кесслер. Для каждого разведения используют отдельную стерильную пипетку. Посевы культивируют при 43°С в течение 48 ч.
На втором этапе исследования просматривают посевы на среде Кесслер. Из пробирок с наличием газа производят высев штрихом на среду Эндо. Посевы на среде Эндо культивируют при ЗТС в течение 24 ч.