Выявление возбудителя сибирской язвы (часть 1)
Колонии, подозрительные на Вас. anthracis, отвивают на поверхность скошенного МПА и МПБ для получения чистой культуры, которую используют в дальнейшем для определения видовой принадлежности выделенного микроба. Для этого производят высев на цветной ряд, состоящий из следующих сред: МПБ, МПА, МПЖ, молока, агара или бульона с кровью, ставят биологическую пробу на опытных животных, реакцию преципитации.
Постановка биологической пробы. Из исследуемого материала готовят взвесь на физиологическом растворе. 0,5 мл этой взвеси вводят двум белым мышам подкожно в область спины. При исследовании материала от свиней (подчелюстные лимфатические узлы) опытных животных заражают молодой (16-часового роста) чистой культурой. После гибели мышей, которая наступает через 24—72 ч, их вскрывают; из крови сердца, печени, селезенки и места заражения готовят мазки и производят посевы на питательные среды (МПА, МПБ). Одновременно с бактериоскопией исходного материала в сомнительных случаях проводят реакцию преципитации (РП).
Постановка РП. 2 г исследуемого материала мелко нарезают, помещают в пробирку и заливают 10 мл карболинизированного 0,5%-ного физиологического раствора. Если исследуют свежий материал, то его предварительно выдерживают в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. Полученный экстракт кипятят 30—40 мин и фильтруют через асбестовую нейтральную вату до полной прозрачности. Прозрачный экстракт в количестве 0,25—0,3 мл вносят в узкую пробирку и под него подслаивают такое же количество преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, профильтрованной через бумажный фильтр. В случае положительной реакции через 3—8 мин на границе сыворотки и экстракта появляется преципитирующее кольцо; при сомнительной реакции оно появляется через 10—15 мин; при отрицательной — кольцо отсутствует. При проведении РП контролем служат стандартный сибиреязвенный антиген и стандартная сибиреязвенная сыворотка, нормальная сыворотка с исследуемым экстрактом, преципитирующая сыворотка с физиологическим раствором. В первой контрольной пробирке должно образоваться кольцо, а в двух других — нет, т. е. реакция отрицательная.
Основанием для постановки диагноза на сибирскую язву являются наличие капсул в мазках из органов, а в мазках из культуры — грамположительных палочек, расположенных в виде цепочек; концы палочек, обращенные друг к другу, резко обрублены; характерный рост на МПА, МПБ, МПЖ; положительная РП и положительный результат биологической пробы.
При бактериологическом исследовании на сибирскую язву, особенно несвежего материала, часто обнаруживают большое количество посторонней микрофлоры. В этом случае трудно дифференцировать Вас. anthracis от антракоидов, псевдоантраксных палочек и других спорообразующих сапрофитных аэробов, положительно красящихся по Граму и имеющим колонии, сходные с колониями сибиреязвенного микроба.
Экспресс-методы дифференциации Вас. anthracis и почвенных спорообразующих бактерий. Для дифференциации необходимо сделать посевы на МПБ с кровью, МПЖ и исследовать культуру микроорганизма на подвижность. Для ускоренной дифференциальной диагностики возбудителя сибирской язвы и сходных с ним почвенных аэробных бацилл рекомендуется использовать следующие тесты: феномен «жемчужное ожерелье», чувствительность к сибиреязвенному бактериофагу, свертываемость желтка куриного яйца, гемолитическую активность, феномен капсулообразования.