Выявление возбудителя сибирской язвы (часть 2)
Феномен «жемчужное ожерелье». В две пробирки с МПА, содержащими 0,5 и 0,05 ед. пенициллина, и в контрольную пробирку без пенициллина (контроль I) вносят по 0,25 мл испытуемых 3-часовых бульонных культур. Культуры почвенных бацилл, засеянные на МПА и МПА с пенициллином, служат контролем II. Посевы помещают в термостат при 37°С. Через 3 ч из конденсационной жидкости берут материал и готовят мазки, которые фиксируют в спирте — эфире и окрашивают метиленовым синим, разведенным фуксином, или по Граму.
При положительной реакции теста «жемчужное ожерелье» бациллы сибирской язвы, засеянные на МПА с пенициллином, приобретают шарообразную форму, а цепочки их имеют вид ожерелья. Споровые сапрофитные аэробы (контроль) имеют обычную форму палочек.
Чувствительность к сибиреязвеннному фагу. Для постановки этого теста применяют фаг «Гамма МВА». Исследуемую культуру высевают в 3 пробирки на скошенный МПА и выдерживают в термостате 20 мин при 37°С. Пробирки ставят вертикально в штатив. В 2 пробирки вносят по капле неразведенный фаг, третья пробирка является контролем (без фага). Действие фага устанавливают через 6—8 ч. В контрольной пробирке по всей поверхности агара наблюдается обычный рост культуры. В пробирках с фагом по ходу стекания капли на поверхности агара образуется прозрачная дорожка лизиса с бордюром роста культуры по бокам дорожки. Наиболее четко явление лизиса наблюдается через 16—18 ч. Этот метод получил название способа «стекающей капли».
Свертываемость желтка куриного яйца. Свертываемость желтка куриного яйца определяют следующим образом. Исследуемую культуру высевают в пробирку со средой Дрожжевкиной. Посевы помещают в термостат при 37°С и выдерживают от 8 до 24 ч. За это время сибиреязвенная палочка вызовет коагуляцию желтка куриного яйца. Большинство же спорообразующих аэробов коагулируют желток уже через 6—8 ч.
Гемолитическая активность. Ее определяют путем .засева культуры на чашки с кровяным агаром или на МПБ с кровью. Посевы помещают в термостат при. 37°С на 20—24 ч.
Для возбудителя сибирской язвы в отличие от сапрофитных бацилл характерно отсутствие гемолиза как вокруг колоний на МПА, так и в МПБ с кровью.
Феномен капсулообразования. Испытуемую культуру засевают на среду ГКИ и помещают в термостат при 37°С. Через 30—120 мин наблюдается образование капсул у отдельных сибиреязвенных палочек, а через 16—18 ч — у большинства.
При хронических сибиреязвенных процессах, сопровождающихся некрозом ткани, обнаруживают лишь слабоокрашенные тени, напоминающие сибиреязвенные бациллы.