Выявление бактерий рода Salmonella (часть 1)
На дифференциально-диагностических средах (Эндо, Левина) учитывают подозрительные колонии, характерные для сальмонелл. В случае отсутствия роста колоний, типичных для сальмонелл на этих средах, через 16 ч производят пересев со среды обогащения на одну из элективных сред.
Пересевы со сред обогащения целесообразно производить на среду Плоскирева, так как число случаев выделения сальмонелл на этой среде наибольшее. Эта среда ингибируст рост вульгарного протея, или он вырастает на ней в О-форме.
При обнаружении на среде Эндо или Левина подозрительных на сальмонелл колоний готовят мазки, окрашивают их по Граму, исследуют подвижность микробов. Одновременно с микроскопией ставят реакцию агглютинации на предметном стекле с поливалентной агглютинирующей сальмонеллезной сывороткой пяти основных групп (B1, С1, С2, D1, E1). В ветеринарной практике чаще всего встречаются бактерии этих групп. Отрицательная реакция с поливалентной сывороткой указывает на то, что испытуемая культура не принадлежит к группам B1, С1, С2, D1, E1. Если испытуемая культура дает положительную агглютинацию с поливалентной сывороткой, то это позволяет отнести ее к роду Salmonella одной из пяти групп. Такую культуру окончательно идентифицируют в РА с монорецепторными агглютинирующими сальмонеллезными О- и H-сыворотками, устанавливая в ней наличие не всех присущих ей антигенов, а лишь основных, имеющих значение для дифференциации.
Сначала культуру испытывают в реакции агглютинации с одной из О-сывороток. Выбирают сыворотку, исходя из вида животного, от которого выделена испытуемая культура, серотипа сальмонелл, наиболее часто встречающегося у данного вида животных. При отрицательной реакции с первоначально взятой О-сывороткой культуру испытывают в РА с остальными четырьмя групповыми О-сыворотками и на основе положительной реакции агглютинации относят культуру к одной из серологических групп.
Затем культуру испытывают в РА с Н-сыворотками пепвой и второй фазы. В выборе сывороток для реакции исходят из антигенной структуры сальмонелл той группы, к которой отнесена определенная культура, с учетом вида животного, от которого она выделена. При положительной РА с определенными О- и Н-сыворотками испытуемую культуру относят к одному из серотипов.
При идентификации сальмонелл по антигенной структуре иногда возникает трудность в определении Н-антигена или одной из его фаз, что может быть обусловлено угнетением или утратой Н-антигена (потрпя подвижности), либо преобладанием какой-либо одной фазы.
Для восстановления агглютинабильности и выявления специфической фазы Н-антигена можно использовать метод роения в чашках по Свену Гарду. Принцип этого феномена основан на том, что при добавлении к агару гомологичной Н-сыворотки подавляется подвижность бактерий, зависящая от этой фазы. Фаза, не подвергающаяся влиянию сыворотки, разрастается и может быть выделена из краевой части колонии.
Постановка реакции агглютинации. На предметное стекло из ампулы наносят каплю неразведенной сыворотки. Затем платиновой петлей берут испытуемую 20-часовую агаровую культуру и тщательно растирают ее в капле сыворотки.
При положительной реакции (через 1—2 мин) образуется агглютинат, который можно наблюдать в виде плотных комочков, зернышек (О-агглютинация) или крупных, рыхлых, легко разбивающихся хлопьев (Н-агглютинация). С образованием агглютината жидкость становится прозрачной. При отрицательной реакции культура распределяется в капле в виде гомогенной взвеси.