Исследование на выявление анаэробных клостридий
Эти исследования проводят при подозрении на следующие заболевания: эмкар (эмфизематозный карбункул), злокачественный раневой газовый отек, брадзот овец, дизентерию ягнят, энтеротоксемию овец, столбняк, ботулизм, некробактериоз.
Материалом для исследования при эмкаре и злокачественном раневом отеке являются кусочки пораженных мышц, отечные ткани, лимфатические узлы, печень, селезенка; при брадзоте овец — кровь из сердца, слизистая оболочка сычуга и тонкого отдела кишечника, инфильтрат подкожной клетчатки; при дизентерии ягнят и энтероток-семии-овец—содержимое кишечника, пораженная почка; при столбняке — раневой секрет, гной, кусочки тканей из глубоких слоев пораженных участков; при ботулизме — содержимое желудка, толстых кишок, селезенка, головной мозг, доля печени; при некробактериозе — некротические фокусы пораженных органов.
Диагноз на анаэробные инфекции ставят на основании бактериоскопии, посева материала и биопробы на животных.
При просмотре мазков, окрашенных по Граму, обращают внимание на форму, расположение клеток, наличие спор и капсул, отношение к окраске по Граму.
Для посева материал обжигают и навеску массой 10 г растирают в стерильной ступке с добавлением двойного количества физиологического раствора.
По 3—5 мл приготовленной суспензии засевают в 4 пробирки со средой Китта-Тароцци, предварительно прогретой в кипящей водяной бане в течение 20—30 мин, а затем быстро охлажденной до 50°С. Посевы перед термостатированием прогревают (для всех указанных анаэробов): две пробирки — при 80°С в течение 20 мин; при исследовании на Сl. botulinum типа Е одну пробирку прогревают при 60°С в течение 15 мин, другую— при 80°С в течение 20 мин. Остальные пробирки оставляют непрогретыми.
При подозрении на Cl. botulinum типа Е две пробирки (одну непрогретую и одну прогретую при 60°С) выдерживают при 28°С; другие две пробирки (непрогретую и прогретую при 80°С) инкубируют при 37°С. Посевы выдерживают 5—10 сут и ежедневно наблюдают за ростом. При обнаружении роста проводят микроскопию.
В случае необходимости изучают культуральные и ферментативные свойства. Для биологической пробы используют исходный материал, а также культуру.
При подозрении на эмкар заражают внутримышечно морскую свинку взвесью дозой 0,5—1,0 мл, которая погибает через 12—24 ч.
При подозрении на брадзот овец заражают подкожно или внутримышечно морскую свинку, которая погибает через 1—2 сут.
При подозрении на дизентерию ягнят и энтеротоксемию овец заражают внутримышечно кроликов или морских свинок, которые погибают в течение первых суток.
При подозрении на столбняк заражают фильтратом из культуры . (0,5—0,8 мл) подкожно белых мышей в области корня хвоста, животные погибают на 3—4-е сутки.
При подозрении на некробактериоз заражают подкожно кроликов и белых мышей (доза 0,5—1,0 мл). На месте инъекции, особенно на ухе у кроликов, появляется некроз.
Для исследования на ботулизм материал растирают в ступке со стерильным физиологическим раствором (1:2), выдерживают при комнатной температуре 1—1,5 ч (для экстрагирования токсина), затем фильтруют или центрифугируют при частоте вращения 3000 мин-1 в течение 15—20 мин. К 0,5—0,8 мл фильтрата добавляют 0,2 мл смеси диагностических моновалентных противоботулинических сывороток типа А, В, С, D, Е, F по 0,04 мл каждого типа. Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин.
Двум мышкам вводят по 0,5—0,8 мл исследуемого фильтрата внутрибрюшинно или центрифугата внутривенно. Двум другим , мышкам вводят смесь фильтрата и сыворотки (аналогичное испытание может быть проведено с 6—7-суточной культурой, выращенной на среде Китта-Тароцции).
Если мыши, получившие один фильтрат (без сыворотки), погибли, а контрольные (которым ввели смесь фильтрата с противоботулинической сывороткой) выжили, то это говорит о наличии в исследуемой пробе мяса токсина Cl. botulinum.
В случае гибели всех мышей следует .повторить реакцию нейтрализации токсина Cl. botulinum с экстрактами, разведенными в 5, 10, 20 и даже 100 раз.
При обнаружении в испытуемом материале ботулинического токсина необходимо поставить развернутую реакцию нейтрализации для определения типа токсина с типоспецифическими диагностическими сыворотками.