Определение активности
Проверку активности биологически активных препаратов проводят на лабораторных животных.
Определение активности инсулина. Оценка на активность различных препаратов инсулина основана на определении их свойства вызывать понижение количества сахара в крови животного организма.
Стандартным препаратом является кристаллический инсулин активностью 24,5 и. е. в 1 мг. За 1 и. е. принимают специфическую активность 0,4082 мг этого препарата.
Для определения активности инсулина стандартный препарат разводят подкисленной водой до рН 2,5. В 1 мл раствора должно содержаться 20 и. е.
Опыты проводят на 12 здоровых кроликах обоего пола массой 1,8—2,0 кг. Животных содержат в одинаковых условиях. Целью опыта является определение дозы исследуемого препарата, вызывающей в остром опыте на кроликах снижение сахара в крови, одинаковое со снижением содержания этих веществ, вызываемом на тех же самых животных определенной дозой стандартного препарата.
Кроликов за 18—24 ч до опыта выдерживают на голодной диете.
Одной группе кроликов в количестве 6 голов вводят подкожно по 0,5 и. е. стандартного препарата на 1 кг массы, другой группе в той же дозе — испытуемый препарат. Оба препарата вводят в одном и том же объеме растворителя (0,5—0,75 мл на 1 кг массы). У кроликов в крови, взятой из ушных вен, определяют содержание сахара перед введением препарата и через 1, 2, 3, 4 и 5 ч после введения инсулина.
Из данных всех пяти определений вычисляют среднее. Для каждого животного отдельно вычисляют, принимая начальный уровень за 100%, процентное снижение сахара, вызванное введением инсулина.
По истечении 5 дней опыт повторяют; кроликам, получившим испытуемый препарат, вводят стандартный препарат, а получившим стандартный препарат — испытуемый и, как в первом случае, определяют процентное снижение сахара в крови. Для обоих препаратов получают данные на 12 животных и вычисляют средний результат.
Если разница в процентном снижении сахара, вызванном действием того или другого препарата, будет меньше +5%, препараты считают равноценными и по количеству взятого для опыта препарата вычисляют содержание единиц действия в 1 мг неразведенного препарата. Белю разница в данных будет больше ±5%, то опыт повторяют, меняя концентрацию испытуемого препарата до тех пор, пока расхождение це будет находиться в пределах не больше ±5%.