Среды для обнаружения в объектах внешней среды бактерий группы кишечных палочек (часть 2)
Для приготовления дрожжевого автолязата берут прессованные пекарские дрожжи, нарезают их небольшими кусками и закладывают в бутыли с таким расчетом, чтобы автолизат занимал около 1/5 вместимости бутыли (4 кг дрожжей помещают в 20-литровую бутыль). Бутыль с дрожжами ставят на двое суток в термостат при 60°C. По мере разжижения дрожжей бутыль встряхивают для равномерного прогревания содержимого (1—2 раза в сутки). Конец автолиза характеризуется полным разжижением дрожжей. Автолизат должен иметь коричневый оттенок и приятный запах. После окончания автолиза в бутыль добавляют тройное (по исходной массе дрожжей) количество теплой водопроводной воды (на 4 кг дрожжей 12 л воды). Разведенный- автолизат стерилизуют при 121°С в течение 30 мин. Затем его оставляют на 5—7 дней для отстаивания.
Среда Эндо. Среду готовят следующим образом. К 100 мл расплавленного и охлажденного до 70°С МПА (рН 7,4) добавляют 1 г химически чистой лактозы, предварительно растворенной в небольшом количестве (2 мл) стерильной дистиллированной воды. Отдельно в пробирках готовят 2—3 мл спиртового насыщенного раствора основного фуксина и 10 мл 10%-ного водного раствора сернистокислого натрия (Na2SO3). В стерильную пробирку отмеривают 1 мл раствора фуксина и добавляют раствор сернистого натрия до обесцвечивания фуксина (бледно-розовый цвет). Приготовленную смесь вливают в расплавленный агар, хорошо перемешивают, стараясь избежать образования пены, и разливают по чашкам. Горячий агар имеет бледно-розовый цвет, при застывании он становится бесцветным. Бактерии группы кишечных палочек при росте на этой среде дают красные колонии с металлическим блеском, сальмонеллы и шигеллы — бесцветные.
Среду Эндо можно приготовить и другим способом. К 100 мл расплавленного МПА добавляют 1,4 г смеси следующего состава: 1 г основного фуксина, 5,4 г — сернистокислого натрия, 2 г двууглекислого натрия, 20 г лактозы, 20 г сахарозы. Смесь предварительно тщательно растирают в ступке (не менее 30 мин) и развешивают по 1,4 г. К 100 мл МПА добавляют 1,4 г указанной смеси, перемешивают, затем кипятят 20 мин на водяной бане и разливают в стерильные чашки Петри.
Среда Эндо (модифицированная). Среду применяют для ускоренного выращивания бактерий группы кишечных палочек.
К 100 мл питательного агара добавляют 1,5 г лактозы, 200 мг сульфита натрия, 0,8 мл 10%-ного спиртового раствора основного фуксина, 0,004 мг кристаллического витамина В1, смешивают, разливают в чашки.
Среда Кларка. Среду применяют для реакции с метиловым красным. Состав среды: протеоза (или другой пептон, дающий такие же результаты) 5 г, декстроза 5 г, двухосновный фосфорнокислый калий 5 г, дистиллированная вода 800 мл. Смесь нагревают 20 мин, периодически помешивая; фильтруют, охлаждают до 20°С и доводят объем до 1000 мл дистиллированной водой. Разливают в пробирки по 10 мл, стерилизуют при 12°С в течение 12—15 мин. К среде добавляют индикатор (метиловый красный 0,1 г, спирт этиловый 300 мл, после растворения доводят до 500 мл дистиллированной водой).
Среда Козера. Состав среды следующий: натрий аммоний фосфорнокислый 1,5 г, калий фосфорнокислый одноосновной 1 г, магний сернокислый 0,2 г, натрий лимоннокислый 2,5—3 г, 0,5%-ного спиртового раствора бромтимолового синего 10 мл, вода дистиллированная 1000 мл. Разливают в пробирки и стерилизуют при 120°С в течение 15 мин.
Среда Симмонса. Состав среды: к среде Козера добавляют 2% агара, доводят рН до 7,2—7,4, стерилизуют в автоклаве при 112°С в течение 15 мин. Индикатор добавляют после стерилизации, перед разливкой в стерильные пробирки. Среда имеет оливково-зеленый цвет.